《电视剧远远的爱-高清影视在线寓目 - 永世影戏网》剧情简介：在这场要害的角逐中她却只能作壁上观眼睁睁地看着球队在落伍中苦苦挣扎当吴梦洁扣球失误中国队遗憾地输掉角逐时镜头捕获到了朱婷落寞的神情那一刻她的默然或许比千言万语更让人心疼果真少年出英雄我们真的老了以后神州大陆是你们这些年轻人的天下了余之远禁不住想到了叶天马上感伤不已电视剧远远的爱-高清影视在线寓目 - 永世影戏网芷若慕容复取出一金一银两块卷帛这才仰面看向周芷若目中带着询问之色非肌肉浸润性乳头状尿路上皮肿瘤的多参数分类：团结形态学、表型和分子特征以刷新危害分层2023-03-14 01:51·医学镜界Sander P, Harland N, Serna-Higuita LM, Bonzheim I, B?smüller H, Stenzl A, Fend F. Multiparametric Classification of Non-Muscle Invasive Papillary Urothelial Neoplasms: Combining Morphological, Phenotypical, and Molecular Features for Improved Risk Stratification. Int J Mol Sci. 2022 Jul 23;23(15):8133. doi: 10.3390/ijms23158133. PMID: 35897708; PMCID: PMC9330009.一、简介膀胱癌是天下上最常见的癌症之一每年约有 550,000 例 [ 1 ]阻止诊断时约莫 75% 的膀胱癌是初级别、非肌层浸润性乳头状肿瘤被称为非肌层浸润性膀胱癌 (NMIBC) [2 ]NMIBC 包括侵占固有层和结缔组织的乳头状肿瘤凭证 TNM 分类分为 T1、Ta 和 Tis凭证其形态特征这些肿瘤可进一步分为初级别和高级肿瘤初级别肿瘤 Ta 和 T1 在 5 年随访中经常复发 (31–78%) 但很少希望为浸润 (少于 1% 和 45%)因此预后优异 [3 , 4 , 5 ]另一方面高级别乳头状肿瘤可能生长为肌层浸润性膀胱癌 (MIBC)后者通�；嵘の� [ 6]]. 因此在尿路上皮癌的治疗中病理分级简直定旨在将肿瘤分为差别的预后组以评估治疗效果并优化患者管理针对膀胱非侵入性乳头状病变的病理分级提出了几种分级系统 [ 7 ]1973 年的 WHO 分类将膀胱尿路上皮癌分为 G1、G2 和 G3 级；然而由于这在界说 G2 肿瘤方面保存一些局限性因此它被 2004/2016 WHO 分类系统所取代 [ 8]. 该系统现在普遍用于对差别组织学亚组中的非肌肉浸润性尿路上皮瘤形成举行强有力的分类包括低度恶性潜能的乳头状尿路上皮瘤称为 PUN-LMP、初级别乳头状非浸润性尿路上皮癌 (LG-PUC) 和高级别乳头状非浸润性癌 (HG-PUC)然而该计划也给诠释带来了一些难题导致视察者间的变异性相对较高在 PUN-LMP 病例中为 12-39%在 LG-PUC 中为 21-63%在 HG-PUC 中为 18-56% .近年来随着新一代测序手艺的泛起膀胱癌的诊断不但关注形态学还关注分子特征在 UROMOL 研究中NMIBC 肿瘤凭证其转录特征分为三类显示出细胞周期基因和分解标记物表达的差别 [9 ]别的隆德大学小组凭证可激活的靶向和转录因子确定了五个差别的实体包括 Uro A、基因组不稳固、浸润性 SCC 样和 Uro B 亚型 [10]它们大致对应于基底和管腔北卡罗来纳大学分类中形貌的亚组 [ 11]. 这些分子亚群已变得很是主要由于它们与临床预后直接相关但尚未进入临床实践 NMBIC 患者的通例治疗是经尿道膀胱肿瘤切除术 (TURBT)团结或不团结卡介苗 (BCG) 膀胱内治疗以降低希望危害然而只管 BCG 治疗有用60% 的患者可能在 12 个月后复发20% 的患者可能希望为 MIBC不乐成的 BCG 治疗患者需要根治性膀胱切除术或化学疗法和放射疗法这两者都与相当大的发病率相关因此需要其他疗法如免疫检查点抑制剂和基于其分子谱的疗法来改善膀胱癌的发病率 在这项研究中我们从组织病理学、免疫表型和突变状态等三个差别层面研究了非侵入性 PUC 的特征旨在举行准确和稳健的分类该分类包括使用形态学特征、包括 CK20、p16、p21、p53、MIB-1、有丝破碎标记物 p-HH3 和 FGFR3（成纤维细胞生长因子受体）的免疫组织化学组以及与复发和复发相关基因的靶向突变剖析预后包括FGFR3、TP53、PTEN、PIK3CA、ERCC2和STAG22. 效果2.1. 行列形貌本研究共纳入 45 例非浸润性尿路上皮乳头状瘤变患者最初分类为 pTa组织质量优异适合进一步剖析临床信息总结于表格1. 男女比例为 2.75:1中位年岁为 75 岁（规模 50-95 岁）凭证 TNM 分类39/45 (86.6%) 患者被归类为纯 pTa而 6/45 (13.3%) 患者在另一个部位有 pT1 病变19 例 (42.2%) 在膀胱的两个或更多区域显示多个肿瘤定位而 26 例显示单个病变不到一半的患者复发 (48.4%)只有 52.6% 的患者在两年的随访中没有复发凭证 44 名患者的现有临床数据只有 25/44 (56.8%) 患者接受了连忙治疗13/44 (29.5%) 患者接受了连忙 MMC 滴注所有组织学 HC-PUC 诊断的患者 (12/44, 27.3%) 均接受了再 TUR-BT 治疗19 名 (19/44, 43.2%) 患者仅接受医学视察但未给予治疗表格1).表格1非浸润性尿路上皮乳头状瘤变病例的临床特征n = 45 (%)中位年岁（规模） 75 岁 (50–95)性别 n (%)男性 33 (73.3)女性 12 (26.6)M:F比率 2.75:1肿瘤分期TNM n (%)pTa 39 (86.6)pTa 和 pT1 6 (13.3)肿瘤定位2 个或更多位置 19 (42.2)侧壁 10 (22.2)后壁 6 (13.3)三棱属 3 (6.6)颈部/极点 3 (6.6)膀胱圆顶 2 (4.4)前壁 2 (4.4)组织学幻灯片中的逼尿肌 30 (66.7)诊断后连忙治疗 * ( n = 44) n (%)无治疗 19 (43.2)连忙膀胱内滴注MMC 12 (27.3)重新TUR-BT 13 (29.5)两年随访中的复发率 % * 48.4%临床历程中的进一步治疗无需进一步治疗 12 (27.3)进一步的 BCG 或 MMC 滴注 10 (22.7)TUR-B 31 (70.5)膀胱切除术和 TUR-B： 2 (4.5)膀胱切除术、TUR-B 和 BCG 治疗 2 (4.5)在单独的窗口中翻开MMC：丝裂霉素C；BCG卡介苗（BCG）；TUR-BT经尿道膀胱肿瘤切除术* 百分比是针对 44 名患者盘算的由于 1 例患者的一些临床数据不可用2.2. 组织学分类对原始诊断和原始诊断报告 (ODR) 不知情的三位病理学家的诊断一致性数据报告于表 2. PUN-LMP 诊断的视察者间变异性适中 (57%)LG-PUC 病例优异 (67%)HG-PUC 病例极好 (87%)在较量 PUN-LMP 和 LG-PUC 诊断时发明了最显着的视察者间变异性Fleiss Kappa 指数相当低为 0.43 ( p= <0.001)95% 置信区间在 0.398–0.635 之间当至少有两名自力视察员告竣一致意见时就建设了共识诊断凭证共识只有 18% 的病例被归类为 PUN-LMP但一半（51.1%）的患者属于 LG-PUC 种别33.3% 的患者被归类为 HG-PUC在后续行动中如预期的那样在 HG-PUC 病例中视察到更高的复发率与 LG 和 HG-PUC 的 23 个月和 5 个月相比PUN-LMP 的病例显示出更高的中位无复发（34 个月）两年复发剖析显示与 LG-PUC (42.7%) 和 PUN-LMP (33.3%) 相比HG-PUC 的复发率 (79.5%) 更高（p = 0.14图1). 凭证增补表 S2中的共识诊断形貌基线临床特征和随访图1组织学分级和无复爆发涯（一）代表性组织学图像显示差别肿瘤品级（PUN-LMP、LG-PUC 和 HG-PUC）的主要特征（乙）通过共识诊断较量肿瘤分级的无复爆发涯期的 Kaplan-Meier 剖析（丙）较量 TNM 分类和肿瘤分级的无复爆发涯期的 Kaplan-Meier 剖析PUN-LMP低度恶性潜能的乳头状尿路上皮瘤；LG-PUC初级别尿路上皮乳头状癌；HG-PUC高级别尿路上皮乳头状癌表 2WHO 2004/2016 组织学种别之间的视察者间变异性年级 网上争议解决 诊断 P 1 诊断 P 2 诊断P 3 共识诊断 视察者间变异性 (%) 福莱斯卡帕PUN-LMP 18 (40%) 16 (35.6%) 8 (17.8%) 6 (13.3%) 8 (17.8%) 57% 0.43 **LG-PUC 14 (31.1%) 15 (33.3%) 22 (48.9%) 27 (60%) 23 (51.1%) 67% 0.41 **HG-PUC 13 (28.9%) 14 (31.1%) 15 (33.3%) 12 (26.7%) 14 (31.1%) 87% 0.81 **在单独的窗口中翻开PUN-LMP低度恶性潜能的乳头状尿路上皮瘤；LG-PUC初级别尿路上皮乳头状癌；HG-PUC高级别尿路上皮乳头状癌；P 1、2、3病理学家 1、2 和 3** p值 < 0.001 Fleiss Kappa2.3. 免疫组化特征及与肿瘤分级的相关性Spearman 的组织评分品级相关矩阵在诊断种别之间没有正相关除了增殖指数它与 p-HH3 染色评估的有丝破碎计数呈正相关（图 2). CK20、p53 和增殖率 (MIB-1) 是识别具有较高组织学分级和不良效果的病例的合适工具这三个标记物在 LG-PUC 和 HG-PUC 病例中显示出比 PUN-LMP 病例更高的组织评分 ( p < 0.05) (表3和图 2). 肿瘤抑制因子 p53 在三个亚组中显示异质染色但与 PUN-LMP 相比在分类为 LG-PUC 和 HG-PUC 的病例中体现出更高的表达 ( p = 0.06)别的与 LG- 或 HG-PUC 病例相比归类为 PUN-LMP 的病例显示 CK20、p53 染色较弱p-HH3 评估的增殖和有丝破碎率较低（p< 0.001)与 HG-PUC 组相比LG-PUC 病例显示出相似的 CK20 和 p53 组织评分相比之下HG-PUC 病例的增殖率 (MIB-1) 和有丝破碎计数得分较高一些 PUN-LMP 和 LG-PUC 病例显示有丝破碎计数较高但在这些病例中与 HG-PUC 相比有丝破碎仅限于基底层细胞周期卵白 p21 和 p16 在病例中染色不匀称与组织学分级无相关性总共有 28/37 (75.7%) 个病例显示所有病例均缺乏 FGFR3 染色但分类为 LG-PUC 的 6 个病例 (6/20, 30%) 显示 FGFR3 过表达一样平常而言只有 16/25 (64%) 的病例显示缺乏与其突变状态相关的 FGFR3 表达由于一些突变可能导致非功效性卵白质图 2免疫组织化学特征（一）斯皮尔曼品级相关矩阵和免疫组织化学变量的相关意义值显示 Spearman 排名效果；蓝色体现正相关红色体现负相关（乙）小提琴图较量了非侵入性 PUC 种别中用 p-HH3 染色的 10 个高倍视野 (HPF) 中的有丝破碎计数（丙）免疫组织化学标记物的差别组织评分的小提琴图体现非侵入性 PUC 实体关于统计剖析使用未配对t磨练ns= 不显着* p < 0.05** p < 0.01**** p < 0.0001表3凭证组织学分级的病例的组织评分CK20 MIB-1 p-HH3 * FGFR3 p16 p21 p53PUN-LMP 60(6–180) 3(3–30) 2(1–12) 9(1–40) 10(15–270) 150(60–170) 90(50–130)LG-PUC 202(110–270) 25(9–45) 10(5–15) 70(10–82.5) 85(17.5–180) 110(57.5–160) 127.5(100–182.5)HG-PUC 225(172–270) 90(57–97.5) 38.5(25.3–51.5) 26.3(10–82.5) 25(3–225) 97.5(6–191.3) 142.5(97.5–210)p值 0.027 <0.001 <0.001 0.032 0.065 <0.001 0.066在单独的窗口中翻开组织评分中位数 (p25–p75)；PUN-LMP低度恶性潜能的乳头状尿路上皮瘤；LG-PUC初级别尿路上皮乳头状癌；HG-PUC高级别尿路上皮乳头状癌* 10 个高倍视野 (HPF) 中的有丝破碎数2.4. 突变景观总共有 37 个案例使用靶向 NGS 举行了剖析测序的平均读取深度为 6820 次读取 (1141–23,628)突变的漫衍形貌于图 3增补表 S1中总结了详细信息总共判断出 80 个突变66/80 个错义点突变 (82.5%)9 个无义突变 (11.25%) 和 5 个移码突变 (6.25%)SIFT、PolyPhen-2 和 CADD 的剖析展望了对所有报告的错义突变的破损性影响所有基因突变的变异等位基因频率 (VAF) 规模为 3% 至 93%（平均 34%）图 3（一）每个诊断类别的突变和免疫组织化学效果概述（乙）两个和三个子组（划分为右侧和左侧）的聚类剖析（丙）使用聚类图中显示的聚类剖析的无复爆发涯的 Kaplan-Meier 图与分级无关FGFR3是该系列中受影响最频仍的基因归类为 PUN-LMP 的病例主要显示FGFR3改变 (57%, 4/7) 并且没有TP53突变别的在ERCC2、PTEN和PIK3CA中检测到的突变大多是同时爆发的并且总体上不常见 (28.5%, 2/7)初级别 PUC 病例在 17/20 (85%) 病例中同样体现出频仍的FGFR3突变11 例病例在PIK3CA (63.6%, 7/11)、STAG2 (54.5%, 6/11) 和ERCC2 (45.4%)中体现出并发改变, 5/11). TP53突变保存于 2/20 (10%) 病例中HG-PUC 病例显示较低频率的FGFR3改变 (40%, 4/10) 和更多TP53改变 (30%, 3/10)TP53突变病例总是显示出高TP53组织评分但相反并非所有具有高组织评分的病例都体现出TP53基因改变PTEN突变很少见但保存于 PUN-LMP 和 HG-PUC 病例中在所有视察的基因中只有TP53突变与无复爆发涯显着相关（p = 0.024增补图 S1）2.5. 整合形态学、免疫表型和突变状态的聚类剖析聚类剖析清晰地将非侵入性乳头状尿路上皮肿瘤分为两个差别的亚组聚类 1 代表 PUN-LMP 和 LG-PUC 病例的混淆显示低增殖率和有丝破碎计数以及频仍的FGFR3和 STAG2 突变而聚类 2 包括具有高增殖指数和有丝破碎计数的 HG-PUC强 CK20 表达, TP53突变但FGFR3 WT (表 4). 聚类剖析与临床行为亲近相关并显示与第 1 组（分类为 PUN-LMP 和 LG-PUC 的病例）相比第 2 组（分类为 HG-PUC 的病例）的无复爆发涯率较低( p = 0.029 ,图 3公元前）使用三个差别的亚组举行特另外聚类剖析以确定 PUN-LMP 和 LG-PUC 病例是否可以脱离(图 3B左侧）然而在第 1 组和第 2 组中发明了 PUN-LMP 和 LG-PUC 混淆病例并且该簇与组织学分级无关险些所有归类为 HG-PUC 的病例都被网络到第 3 组（图 3B、C左侧）表 4聚类之间卵白质和突变状态的较量标记 集群 1 集群 2 p -值免疫组织化学 中位数 (p25–p75) 中位数 (p25–p75) Wilcoxon 秩和磨练CK20 160 (80–240) 225 (172.5–270.0) 0.150p53 110 (80–160) 158.7 (107.5–212.5) 0.013MIB-1 15 (3–33.9) 90 (68.5–97.5) <0.001FGFR3 60 (1–80) 3 (1.0–65.0) 0.101p-HH3 * 8 (3–12) 38.5 (25.7–51.5) <0.001突变状态 n (%) n (%) χ2磨练_FGFR3 18 (40.0%) 3 (6.0%) 0.028STAG2 8 (17.2%) 1 (2.2% 0.236TP53 2 (4.4%) 5 (11.1%) 0.023ERCC2 7 (15.5%) 4 (8.8%) 0.717PIK3CA 10 (22.2%) 3 (6.6%) 0.724在单独的窗口中翻开免疫组织化学：数据体现为组织评分值的中位数 (p25–p75) 或 (*) 10 HPF 中的有丝破碎数突变状态由突变病例数 (%) 体现Kaplan-Meier 剖析显示与集群有很强的相关性由于第 1 组和第 2 组的无复爆发涯率始终较高LG-PUC 和 PUN-LMP 之间保存重叠 (p = 0.055 )第 3 组始终显示出较高的复发率（图 3C左面板）执行比例 Cox 回归模子以预计 RFS 和聚类剖析之间的关联单变量和多变量剖析证实临床特征和治疗不影响 RFSRE-TURB 治疗体现与复发显着相关但未思量由于 RE-TURB 仅在 HG-PUC 病例中举行（增补表 S4）多变量剖析证实临床特征和治疗不影响无复爆发涯并且复发与由组织学特征、卵白质表达和突变状态爆发的簇组自力相关（增补表 S5 和 S6 ）3.讨论在这项研究中我们接纳了非侵入性乳头状尿路上皮肿瘤的多参数分类包括突变状态、免疫表型和组织病理学以试图刷新单独组织学分级的危害评估在之前和我们现在的剖析中乳头状尿路上皮肿瘤的分级具有差到中度的视察者间可重复性然而肿瘤的准确分级关于治疗决媾和降低复发和侵袭的危害至关主要 [ 2 , 17 ]分级的差别可能是由于对分级的形态学特征（结构、细胞学、有丝破碎等）付与差别的权重只管多次实验明确界说分级标准 [18 ]]. 然而众所周知分级系统总是涉及一定水平的主观性影响视察者间的再现性在乳头状尿路上皮肿瘤中最难题的挑战是 PUN-LMP 与 LG-PUC 的区别由于这两种实体都具有典范的乳头状结构即被尿路上皮笼罩的乳头缺乏顶端有丝破碎运动唯一的界说特征是保存和上皮异型和杂乱的数目可以主观评估在 PUN-LMP 的情形下尿路上皮看起来更厚但现实上应该扫除非典范性而在 LG-PUC 的情形下乳头在低放大倍数下显示出有序的外观并且保存非典范性但稍微 [ 19 , 20]. 在我们的研究中与文献一致PUN-LMP 体现出最低水平的视察者间一致性和可重复性并且诊断 LG-PUC 而不是 PUN-LMP 的趋势增添别的在较量 PUN-LMP 和 LG-PUC 时复发率的差别相对相似PUN-LMP 病例的复发率因文献中的研究而异可能是一种受分类标准影响的效果PUN-LMP 的复发率为 17% 至 35%LG-PUC 为 48-71%HG-PUC 病例的复发率为 78%相比之下PUN-LMP 的侵袭危害为 1-3%LG-PUC 为 5%HG-PUC 病例高达 45% [ 21 ]由于组织学特征体现出显着的局限性因此研究了其他工具若有丝破碎计数、增殖率和特异性免疫组织化学标记物的表达作为对尿路上皮肿瘤举行分级的辅助要领使用通过半定量要领评估的有丝破碎活性的研究批注分级的可重复性低并且与预后的相关性差 [ 18 ]然而对乳腺癌的研究批注可以通过定量要领改善有丝破碎计数 [ 22]]. 在我们的研究中使用 p-HH3 免疫染色举行有丝破碎计数以镌汰主观性只管必需提到 p-HH3 染色不可直接与 H&E 切片上的有丝破碎计数举行较量在所有 HG-PUC 病例中均视察到高有丝破碎指数（10 HPF 中 > 20 次有丝破碎）批注 p-HH3 的有丝破碎计数是分级的有用参数通过 MIB-1 染色评估的增殖率也是一个有用的特征但 PUN-LMP 和 LG-PUC 之间的增殖率差别细微且重叠因此无法将其用作分级的唯一参数 [23 ]一些作者报道了 CK 20 和 p53 染色作为尿路上皮发育不良的客观标记 [ 24]. CK20 通常仅在正常尿路上皮的伞状细胞中表达而弥漫性全层 CK20 染色是 HG-PUC 的特征 [ 25 ]然而在 PUN-LMP 和 LG-PUC 病例中报道了纷歧致的 CK20 表达；因此不应单独使用此参数 [ 26 ]近年来强盛的高通量测序手艺的泛起使我们对尿路上皮癌突变情形和特定改变的预后影响的明确取得了重大希望从而导致了膀胱癌的几种分子分类据报道NMIBC 是基因组稳固的肿瘤其特征是FGFR3突变或染色体易位（在约莫 70%的初级别肿瘤中）[ 27、28 ]这可能导致早期尿路上皮增生 [ 29 ]与这些数据一致FGFR3突变是我们系列中最常见的遗传改变（64.1% 的病例）正如预期的那样FGFR3突变与非高级表型相关PIK3CA中的激活突变和粘连卵白复合物肿瘤抑制基因STAG2中的失活突变似乎在发病机制中起次要作用由于大大都这些突变与FGFR3改变同时爆发[ 30、31、32 ]正如在大大都本研究中的案例这批注PIK3CA和STAG2改变自己与低希望危害相关 [ 33 , 34 ]相反高级乳头状癌和浸润性肿瘤经常显示TP53的改变、ERCC2和PTEN基因和通路 [ 35、36 ]很少发明致病性TP53突变但若是保存它们仅在 LG- 和 HG-PUC 中被识别与其他癌症一样代表恶性肿瘤的遗传特征 [ 37、38 ]DNA 解旋酶ERCC2之前被形貌为 MIBC 中顺铂治疗敏感性的生物标记物同样似乎在膀胱癌的爆发中施展作用 [ 39 , 40 ]然而正如本系列中所视察到的它也可以在所有类别的 NMIBC 中识别出来抑癌基因PTEN与 NMIBC (40%) 相比在 MIBC (90%) 中大部分基因失活 [ 41 ]然而在该系列中在 PUN-LMP 病例中也发明了失活的PTEN （2/4 病例爆发突变）具有PTEN或TP53突变的有数 PUN-LMP 和 LG-PUC 病例（通常与高级别肿瘤相关）是否显示出更高的希望危害尚有待视察在我们的主因素剖析中对免疫组织化学和分子标记物的团结评估使我们能够识别出具有显着差别希望危害的两组只管病例数目很少别的这种使用多个参数的聚类剖析批注 PUN-LMP 和 LG-PUC 亲近相关可能代表了一系列生物学行为鉴于 PUN-LMP 和 LG-PUC 使用相同的临床和治疗要领现在基于组织学特征并在其诠释中具有相当大的主观性的区分的基来源理尚不清晰需要对更多病例举行进一步剖析[ 19 , 21 , 42 , 43]. 接纳特另外卵白质和遗传标记的多参数剖析可用于 NMIBC 分级并可能改善临床行为的展望以及复发和希望的危害应该审慎诠释这项研究的效果由于这项研究只代表了有限数目的患者其中只剖析了有限数目的卵白质标记物和突变这项事情主要体现原理研究的证实其中的主要目的是批注多参数要领具有一些有希望的效果应该在更大的行列中举行测试在个性化医疗时代检测突变或其免疫组织化学替换物的分子组关于选择最佳疗法和展望膀胱癌患者的预后至关主要由于 PUN-LMP 和 UPC 代表膀胱癌患者临床历程中的早期诊断因此它们的多参数剖析（包括卵白质生物标记物和突变谱剖析）很有希望应该在更大的行列中举行四、质料与要领4.1. 肿瘤样本在这项研究中我们纳入了图宾根大学医院病理学和神经病理学研究所在 2013 年至 2020 年间诊断为非浸润性乳头状尿路上皮肿瘤的所有样本这些样本切合我们的选择标准：乳头状非肌肉浸润性膀胱癌患者的活检分级作为 PUN-LMP、LG-PUC 或 HG-PUC选择代表性块举行剖析别的19 个没有肿瘤或发育异常的膀胱活检样本用作阴性比照本研究经图宾根大学医学院伦理委员会批准 (547/2021BO2)4.2. 凭证 2016 年 WHO 分类的组织学分类为了凭证 WHO 2016 年分类举行重新分类三位病理学家盲目评估了用苏木精和曙红 (HE) 染色的 3 ?m 厚切片病例被分类为 PUN-LMP、非侵入性 LG-PUC 或 HG-PUC在低、中和高放大倍数（100×、200× 和 400×）下举行细胞学和结构特征的评估[ 8、44]. PUN-LMP 被诊断为具有离散的乳头、细长且未融合的病例大部分被正常的尿路上皮细胞笼罩细胞学异型性、有丝破碎和坏死少少或不保存非侵入性 LG-PUC 活检显示尿路上皮下半部分排列有序的乳头具有轻度细胞学异型和有数的有丝破碎非侵入性 HG-PUC 病例在低倍镜下体现出完全无序的外观这是由于整个上皮高度的结构杂乱、中度至高度异型和有丝破碎运动 [44 ]4.3. 临床数据审查了医疗纪录包括年岁、性别、疾病体现、位置、规模、TNM 分期、治疗和随访无复爆发涯期 (RFS) 是从诊断日期到 5 年或最后一次随访盘算的4.4. 免疫组织化学凭证制造商的计划使用自动染色机（Ventana Medical SystemsTucsonAZUSA）举行免疫染色带电载玻片用 CK20 (M7019, Dako Cytomation, Glostrup, Denmark), p16 (06594441001, CINtech, Roche, Manheim, Germany) p21 (556431, BD Pharmigen, San Jose, CA, USA), p53 (DO-7 , Novocastra, Leica Biosystems, Wetzlar, Germany), MIB-1 (M7240, Dako Cytomation, Glostrup, Denmark), p-HH3 (117C826, IMGENEX, San Diego, CA, USA) 和 FGFR3 (sc-13121, Santa Cruz Biotechnology 德国海德堡）免疫组织化学使用组织评分举行量化如下所述凭证强度和细胞百分比对染色举行评分在膜和细胞质中评估强度并评分为 0：阴性+：弱++：中等+++：强然后通过将染色强度乘以阳性染色细胞的百分比来盘算组织评分别的p-HH3 免疫组织化学用于判断正在履历有丝破碎的细胞通过盘算 2 mm 中染色细胞的数目来评估染色图 2使用 Zeiss Axioskop 显微镜（ZeissOberkochenDeutschland）对尿路上皮的上层举行约莫 10 个一连的高倍视野 [HPF]4.5. DNA提取凭证制造商的说明使用 Maxwell ? RSC DNA FFPE 试剂盒和 Maxwell ? RSC 仪器（Promega美国威斯康星州麦迪逊市）从剩余的活检质料中提取基因组 DNA 凭证制造商的计划使用 Qubit dsDNA HS 检测试剂盒（Thermo Fisher ScientificWalthamMAUSA）的 Qubit 荧光计对 DNA 举行定量如先前报道的那样举行质量控制聚合酶链反应 (PCR) 以确定可扩增的 DNA 长度 [ 45]选择具有至少 200 bp 可扩增 DNA 的病例举行 NGS 靶向剖析4.6. 靶向下一代测序靶向突变剖析由下一代测序 (NGS)（Ion GeneStudio S5 primeThermo Fisher ScientificWalthamMAUSA）使用 AmpliSeq Custom Panel 举行涵盖乳头状非肌肉浸润性尿路上皮膀胱癌中最常见的复发突变基因（完整的编码序列：ERCC2、FGFR3、PIK3CA、PTEN、STAG2和TP53（增补表 S1). 凭证制造商的手册使用 Ion AmpliSeq Library Kit v2.0、Ion Library TaqMan Quantitation Kit、Ion 510、Ion 520 和 Ion 530 Kit—Chef 和 Ion 520 Chip Kit 举行扩增子文库制备和半导体测序（Thermo Fisher Scientific美国马萨诸塞州沃尔瑟姆）五例石蜡包埋的乳头状非肌肉浸润性尿路上皮膀胱用于验证 NGS 面板与人类参考序列相比非同义体细胞变异的变异挪用是使用 Ion Reporter 软件（Thermo Fisher ScientificWalthamMAUSA）举行的4.7. 聚类剖析举行聚类剖析以确定具有相似性的患者组仅对 37 例举行了剖析由于 8 例患者的数据缺失执行变量标准化 (Versi) 以获得零均值和一标准差聚类剖析基于以下变体：组织学分类（PUN-LMP、LG-PUC 和 HG-PUC）、免疫组织化学（CK20、p53、MIB-1、p16、p21、FGFR3 和 p-HH-3）和突变ERCC2 , FGFR3 , PIK3CA , PTEN , STAG2 , TP53状态（突变与非突变）K-Medoids 集群的 Partitioning around Medoids (PAM) 算法用于凭证患者的相似性对患者举行分组由于该算法对噪声和异常值不太敏感在这种要领中每个集群都由集群中的一个数据点体现这些点被命名为簇中心点（簇中的工具其与簇中所有其他成员之间的平均差别最�。�[ 46 , 47 ]使用欧氏距离盘算两个实值向量之间的距离其界说如下：4.8. 统计剖析使用 R 软件版本 4.0（R 统计盘算基金会维也纳奥地利）举行统计剖析使用频率和比例形貌分类变量；数值变量报告为均值和标准差 (±SD) 或中位数和四分位距 (IQR)详细取决于数据的漫衍通过研究峰度、偏度和 QQ 图来评估漫衍的正态性使用卡方磨练评估分类变量执行 Fleiss 的 Kappa 测试以丈量视察者间的变异性通过 Kaplan-Meier 要领剖析无复爆发涯 (RFS)并使用对数秩磨练来磨练组间差别随访界说为从 24 个月到效果爆发或以其他方法删失的时间使用单变量和多变量 Cox 比例危害回归来评估集群和无复爆发涯之间的关联多变量模子的候选危害因素是凭证临床思量和双变量剖析的统计学显着效果选择的执行向后选择以从模子中顺序删除变量通过矩阵相关检查多重共线性效果报告为危害比和 95% 置信区间使用 Schoenfeld 残差评估比例危害假设所有统计磨练都是双侧的并且 多变量模子的候选危害因素是凭证临床思量和双变量剖析的统计学显着效果选择的执行向后选择以从模子中顺序删除变量通过矩阵相关检查多重共线性效果报告为危害比和 95% 置信区间使用 Schoenfeld 残差评估比例危害假设所有统计磨练都是双侧的并且 多变量模子的候选危害因素是凭证临床思量和双变量剖析的统计学显着效果选择的执行向后选择以从模子中顺序删除变量通过矩阵相关检查多重共线性效果报告为危害比和 95% 置信区间使用 Schoenfeld 残差评估比例危害假设所有统计磨练都是双侧的并且p < 0.05 被以为批注具有统计学意义5结论在已往的几十年中团结癌症诊断中差别庞洪水平的分类已成为肿瘤检测和分层的主要工具它们与临床行为有很强的相关性并提供生物学洞察力和对肿瘤的明确这些肿瘤在可重复分类（如 PUN-LMP）中显示出难题在这项事情中我们确认 PUN-LMP 和 LG-PUC 之间的几个组织学、免疫表型和遗传特征显示重叠也反应在可靠地疏散这两个实体的难题上这最终导致了 PUN-LMP 和 LG-PUC 是否代表生物一连体的问题组织学分级未能充分捕获到这一点需要添加分子和表型特征作为辅助工具以更好地举行危害分层
《电视剧远远的爱-高清影视在线寓目 - 永世影戏网》视频说明：磅秤有问题Her singing must be echoed with blood
2025-09-23 17:37:39
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