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《影象王●人工智能英语_自学英语就找影象王_影象王英语...》视频说明：孙凌天善使枪攻击力很强防御相比其他的五大天骄差一些着实选择他突破对我最好长天公主笑着说道照片中这名女性就正在拿钱准备向流动的商贩购置卫生纸在她们事情的地方一样平常较量常去的摊贩或者牢靠的摊位就是买水和泡面的其次就是卖卫生纸卫生巾的照片中的女子正在数钱可以看到她拿的都是零钱钱少利便携带色谱柱相关的100个问题太适用值得收藏2019-06-25 15:33·德斯特cGMP咨询导读色谱柱可分为填充柱和开管柱两大类多为金属或玻璃制作有直管形、盘管形、U形管等形状液相色谱通常均接纳填充柱色谱柱的疏散效果取决于所选择的牢靠相以及色谱柱的制备和操作条件今天整理相关网络资料给各人学习交流本文较长欢迎收藏1、网上对柱子是否可以反冲一直有争论那什么样的柱子可以反冲什么不可以反冲后是正者用照旧反着用详细到各型号柱子不但是ODS柱其他如正向柱、氨基柱、离子交流柱等最好都有诠释答：一样平常的正相反相柱应该都能反冲只有两头筛板孔径差池称的柱子不可反冲不过现在这样的柱子已经较量少见了反冲是为了把柱头的污染物冲洗掉反冲后照旧正着用较量好以免柱子的两头都被污染我们一直提倡的是：正向使用反向冲洗2、我在做要领开发的时间,用乙腈和水作为流动相,在调解梯度的时间发明,刚最先用60%乙腈, RT为2.5分钟,调到40%乙腈,RT没有转变,30%也没有转变,一直调到20%的时间,RT突然变到了约13分钟,讨教这是什么缘故原由?我用的是离子交柱答：离子交流柱的保存时间主要由洗脱液的离子强度和pH决议你现在讲的较量简朴需要把你的要领说的详细一点才华做详细的剖析譬如剖析物是什么情形其含有极性电离基团和非极性基团是什么性子离子交流柱是聚合物基质照旧硅胶基质水相是什么缓冲盐3、关于一根常用的c18柱拿到一根新柱的时间应该怎样举行活化及维护为什么要这样做答：新柱活化现实上是一个平衡的历程除了用流动相平衡外有时间还必需用所测样品对新柱举行平衡特殊是测定分子量较量高的多肽尤其主要由于分子量高的物质分子扩散速率慢平衡所需时间也响应较长详细平衡方法也很简朴多进一再样品直到峰面积和保存时间稳固再举行正式进样测定若是要加速平衡时间把前面用来平衡的进样样品浓度加大或者不等洗脱完成一连进样多针用待测物对新柱平衡目的是将硅胶基质填料外貌具有非特异性吸附的位点的吸附能力饱和掉4、测定多肽一样平常接纳什么柱子流动相是乙腈和水尚有微量的TFA特殊是像类似三肽的短肽应该怎么选择柱子答：分子量不高的多肽一样平常选用通例C18柱就能测定也有用离子交流柱、水性C18柱和Hilic亲水作用柱的5、氨基柱在进酸性样品时很伤柱子如使用一段时间后柱效降低峰形改变怎样恢复答：氨基柱测酸性样品应该是用氨基柱的HILIC模式酸的保存可能会使略带负电荷的氨基官能团质子化导致使用一段时间后关于某些类的剖析物保存性子有所改变或体现在柱效下降建议：用5-10倍的柱体积的含0.5-1.0％NH3的乙腈-水(50:50)溶液冲洗该柱（冲洗后虽然要再用不含碱的流动相洗去多余氨）之后再举行剖析这类酸性剖析物时建议在流动相中略微添加少许氨如0.1％6、色谱柱的手艺都有哪些好比封尾等这些手艺在应用时都体现在那里答：色谱柱手艺包括填料手艺和装柱手艺填料手艺自不待言填料的优劣对色谱柱疏散性能和选择性有决议性影响装柱手艺也没有想象中的这么简朴差别牢靠相、差别粒径、差别柱管内径和长度装柱工艺都有所差别要装出细密、稳固、均一的柱床更多是一门艺术需要履历积累海内和外洋想比我以为色谱柱的差别在于：海内公司以前都不会自己开发填料一样平常买外洋现成填料装柱买到的填料质量控制权不在自己手里另外由于装柱历史短履历积累少装柱工艺也没有完全抵达外洋水平另外对色谱柱性能很要害的基础质料-----裸硅胶国产的还不过关在纯度、粒径和孔径的均一性方面和外洋产品相比差别很大7、色谱柱手艺的差别在那里答：色谱柱手艺包括填料手艺和装柱手艺填料手艺自不待言填料的优劣对色谱柱疏散性能和选择性有决议性影响装柱手艺也没有想象中的这么简朴差别牢靠相、差别粒径、差别柱管内径和长度装柱工艺都有所差别要装出细密、稳固、均一的柱床更多是一门艺术需要履历积累海内和外洋想比我以为色谱柱的差别在于：海内公司以前都不会自己开发填料一样平常买外洋现成填料装柱买到的填料质量控制权不在自己手里另外由于装柱历史短履历积累少装柱工艺也没有完全抵达外洋水平另外对色谱柱性能很要害的基础质料-----裸硅胶国产的还不过关在纯度、粒径和孔径的均一性方面和外洋产品相比差别很大8、柱子在什么情形下可以洗濯一下筛板呢原来也讨论过这个问题我也拆下来洗濯过但我看到柱前段的污染愈甚于是就用刀片刮了刮然后把洗濯好的筛板装置上去问题解决了但使用寿命会不会镌汰呢答：柱头污染了就取出污染的再装一些填料由于加入你刮了些填料那么微观的塔板数就少了假入你刮得未几仅外貌可能就是一些脏物以是问题解决可是以后还会有同样问题再挂那么不小心刮影响柱效建议照旧装一个预柱9、若是柱子取下来安排一段时间需要做什么�；ぢ�答：对一样平常的反相柱也就是洗清洁后放到纯甲醇（乙腈）或者是80%左右的甲醇（乙腈）水中然后用堵头塞紧柱两头以免生涯溶剂挥发应该不需要做特殊的�；�10、流动相中加入适量的四氢呋喃可以改善峰形的机理是什么答：《高效液相色谱要领及应用》于世林编著的上面说：甲醇为质子给予体、乙腈为质子接受体、四氢呋喃是偶极溶剂应该除了极性影响尚有另外的影响因素至于疏散机理照旧较量重大的不可看成是个万能要领11、关于色谱柱的填装问题我小我私家以为现在色谱柱的填装一样平常有3种情形：1.外洋生产填料并填装完成制品卖到海内；2.外洋生产填料海内填装销售；3.海内生产填料海内填装销售一样平常情形下第1种情形卖的最贵也质量最好可是我就不明确了：若是是填料的生产很重大的话那么填装上海内也跟不上去吗为什么换在海内填装就会泛起或多或少的一些小问题呢答：海内填装会泛起质量小问题和海内现在普遍做事没有外洋严谨有关吧若是工艺手艺上没有问题又能制订并切实执行一整套严酷的生产质量管理步伐海内填装和外洋填装并无区别12、国产色谱柱在市场上占有比例怎样啊答：海内色谱柱市场还没有人举行过科学统计连一年色谱柱销售总量也众说纷云更别说海内生产色谱柱所占份额了我预计是占30%左右吧13、预柱或�；ぶ谜站刹槐氐奈侍�原来剖析中药品种时我一直都是用�；ぶ�但来到新公司后发明各人都没有使用几个实验室连�；ぶ济徽业揭桓�也就是说各人历来都没有用过厥后问一个老员工说是有可能影响药品剖析我就想问：装置�；ぶ蠡嵊跋煅菲饰雎�我们做的大多是头孢类的抗生素答：应该这样说加上�；ぶ�一定有利于�；ど字皇芤恍┛帕Ｎ镏实墓Ｈ�一定有害于疏散度和柱效由于�；ぶ行挠凶潘捞寤谋４婵墒侨羰潜；ぶ拥煤�并且只管控制其匹配性和经常替换疏散度和柱效应该影响并不大头孢类的抗生素也要看究竟是质料药照旧制剂喽有些质料药可以凭证色谱柱的消耗选择添加预柱（中心是个筛板）制剂的话若是有辅料严重滋扰或者流动相盐分较量大那照旧最好配个�；ぶ�14、用的是四元梯度泵 A50%甲醇 B50%水 经常泛起�；蚪菡馐鞘裁丛倒试�答：水/甲醇比例在55：45时黏度和柱压有个极大值50：50靠近了这个极值柱压是较量高的但影响柱压最大的照旧填料粒径和色谱柱内径你这个实例中不知用的什么规格的色谱柱系统压力高可能会因溶剂泵中的过滤头供液速率跟不上而导致气泡进入系统�；灿Ω檬怯捎谄萁胙沽ο陆档脑倒试�可思量替换液体通量更大的过滤头15、填料要领的前三种都是湿法吗能不可对四种填充要领做一个简短的说明资料显示：在正常条件下填料粒度＞20?m时干法填充制备柱较为合适；颗粒＜20?m时湿法填充较为理想填充要领一样平常有4种①高压匀浆法多用于剖析柱和小规模制备柱的填充；②径向加压法Waters专利；③轴向加压法主要用于装填大直径柱；④干法柱填充的手艺性很强大大都实验室使用已填充好的商品柱为什么以20um为分界点16、想请您详细说明一下反冲色谱柱的要领是不连检测器吗答：反冲就是将柱子反向连到系统中由于有污染物反冲出来虽然不连检测器出液端直接接到废液瓶就可以17、若是不使用不锈钢讨论而改用ＰＥＥＫ头是否可以完全解决讨论匹配问题答：色谱柱讨论着实大都不是色谱柱厂商自己生产的供货商有多个VICIUpchurchParker等他们的标准相互之间不统一那色谱柱讨论的标准就统一不起来不过一样平常这个问题也不难明决的换个讨论就可以了并且现在有了万用讨论可以配所有差别类型的柱头不泄露毗连死体积又很小18、有的厂商为阻止梗塞使用了较大孔径（2-5um）的前筛板这种情形反冲会将填料冲出那么你们在使用说明书中会说明前后筛板的孔径吗答：若是前后筛板孔径差池称厂商一定也会在说明书里特殊提到的19、我在做多肽药物时遇到下列问题：1）. 基线不稳固波动大流动相 A ：1％TFA水溶液 B:1％TFA乙腈溶液检测波长210nm 流速1.0ml/ml 什么缘故原由怎么解决TFA有什么作用流动相中不加TFA见不到主峰基线优异2）做完肽类样品时怎么冲洗C18较量好；3）药典上先容测定分子量大于2000的样品选择柱子填料的孔径为30nm30nm与10nm对效果有什么区别答：应该是起离子对的作用吧在做多肽类样品的时间300A孔径的填料相对100A孔径一定要选择性好点也就是疏散度相对较量好点流动相加入TFA在反相色谱疏散多肽和卵白质的实验中使用三氟乙酸 (TFA) 作为离子对试剂是常见的手段流动相中的三氟乙酸通过与疏水键合相和残留的极性外貌以多种模式相互作用来改善峰形、战胜峰展宽和拖尾问题三氟乙酸优于其他离子修饰剂的缘故原由是它容易挥发可以利便地从制备样品中除去另一方面三氟乙酸的紫外最大吸收峰低于 200nm 对多肽在低波优点的检测滋扰很小20、waters AtlantisC18柱可以用较高比例的流动相那麽用完后应该怎麽洗濯在什麽系统中生涯比教合适答：反相柱都可以用下面通用的要领洗濯维护：流动相中不含缓冲盐剖析完成后用甲醇（或乙腈）：水＝90：10反向冲洗色谱柱45min流动相中含有缓冲盐剖析完成后先用甲醇（或乙腈）：水＝10：90反向冲洗45min然后再用甲醇（或乙腈）：水＝90：10反向冲洗色谱柱45min；（注重：甲醇（或乙腈）：水＝10：90容易长菌使用时间不可凌驾3天）；水性柱生涯系统也不特殊：短期生涯在所用的流动相中（不含缓冲盐）中恒久生涯在纯甲醇（乙腈）或80%的甲醇（乙腈）/水中21、正相硅胶柱一样平常生涯在什么溶剂内里较量合适答：短期和恒久都建议生涯在正相测定所用的流动相中一样平常是正己烷和少少量的异丙醇22、磷酸盐缓冲盐渗透力强为什么是由于与醋酸盐枸椽酸盐相比基团小吗使用磷酸盐缓冲液与其它缓冲液相比会使色谱柱寿命缩短几多答：经常用磷酸盐在其它条件差未几一样的情形下柱子寿命一定比不必磷酸缓冲盐相对短一些但用磷酸盐也有不可取代的优点吧不然不可能现在大部分人还在用23、反相离子对色谱法中离子对是怎样起作用的是离子对试剂的非极性端消融在填料的非极性端里解离端伸向流动相对含胺化合起离子交流作用照旧样品与离子对天生细密的团结物离子对试剂遮蔽化合物中的极性基团照旧这种团结物是在解离与团结的动态平衡之中答：首先离子对试剂的解离端和目的离子形成离子缔合物降低其极性这样就能较好的在柱子上保存再者凭证疏水效应理论离子对试剂的疏水端是很容易和C18链相互作用的这样更容易在柱子上保存以是我以为离子对试剂作用是混淆保存机制即纯粹的反相保存和离子对保存机制配合作用24、四烷基季铵盐（如四丁基硫酸氢铵、四丁基溴化铵、四丁基氢氧化铵等）在水中电离后也形成了类似N＋H(CH2CH3)3的结构N＋(CH2CH2CH2CH3)4这种结构也能有用的与Si－O－爆发较强的静电作用此类离子对用的较量少但它的作用仅是遮蔽Si－O－吗它对物质的保存性能有何影响实验中发明检测胺化物时流动相中加入磷酸缓冲盐有增添物质保存的趋势而加入三乙胺则会降低物质的保存能力答：前面提到的四丁基氢氧化铵等离子对试剂确实不如辛磺酸钠等极性基是阴离子的离子对试剂用得普遍缘故原由是酸类极性物质很容易通过降低pH值的要领提高在反相色谱中的保存能力降低pH可抑制酸的电离使酸处于中性状态而与疏水碳链的作用力增强而碱类剖析物则受硅胶基质pH上限的严重影响（以前上限是8厥后抬到10直到最近杂化硅胶才将pH上限提到12左右）铵盐类离子对试剂确实有辛磺酸钠等所不具有的屏障硅醇基作用但其主要作用照旧疏水端和疏水牢靠相团结外露的阳离子亲水端和酸阴离子作用从而提高其保存能力虽然同样尚有第二种诠释机理离子对试剂先和剖析物团结遮蔽极性基从而提高极性剖析物在反相色谱中的保存能力并且丁基比辛基疏水性差这种情形下以为后面的团结机理占优势的可能性更大检测胺类化合物加入三乙胺预先和硅醇基团结胺和硅醇基作用被三乙胺取代保存下降是一定的25、统一根色谱柱在剖析完三聚氰胺后再剖析苯甲酸、山梨酸、糖精钠时为什么保存时间会提前答：色谱柱被强保存物质污染后保存时间提前和滞后的情形都有详细要看污染物的性子还要看剖析物、牢靠相和污染物三者配合作用的情形情形较量重大有时间较量难展望是提前照旧滞后不过你平时维护的时间注重在测定后将污染物用有机溶剂反冲洗濯就可以减轻或阻止这种情形的泛起建议每个剖析要领用专门的色谱柱久远看这样更节约色谱柱的用度26、HPLC柱前衍生和柱后衍生的相关问题1）为什么要衍生2）衍生化的分类3）举行衍生适用的化合物有哪些4）举行衍生化的要求有哪些5）柱前衍生和柱后衍生的优弱点答：色谱手艺中的化学衍生法系指在色谱历程中用特殊的化学试剂（一样平常称为衍生化试剂或标记试剂）使样品因素转变响应的衍生物之后举行疏散检测或举行检测的要领目的为：1．将紫外—可见强吸收功效基团引入被检测工具或将其转变为荧光衍生物以提高检测迅速度；2提高对剖析样品的疏散和选择性从是否与HPLC辖档酮机的角度化学衍生法分为在线on line）与离线∣Off line）两种从爆发衍生化的场合分为柱前衍生法pre-columnderivatization）与柱后衍生法（post-columnderivatization）两种现在在HPLC中以离线的柱前衍生法（简称柱前衍生法）与在线的柱后衍生法（简称柱后衍生法）使用居多27、多个样品欠好不离的时间讨教该怎么通过选择合适的柱子来提高疏散度答：提高疏散度可从三个主要影响因向来思量柱效、选择性和保存因子可通过减小填料粒径和增添柱长提高柱效；选择性和牢靠相选择以及pH条件有关通过选择合适的色谱柱和合适的pH可以提高选择性；有时间适当延伸出峰时间增添保存因子也可提高疏散度28、苯基柱氰基柱该什么时间思量用答：苯基柱用于含苯环的芳香族化合物的测准时具有较高的选择性CN柱可作为一个保存能力最弱的反相柱使用也可作为一个活性降低的正相柱使用（保存时间比硅胶柱和氨基柱低许多）29、同样类型柱子尚有长度粒径等差别这些该怎么去选择答：长度和粒径都是用来改变柱效的选择原则是够用就好30、我前几天刚刚装上一个新的C18柱在进样之前我用100%的甲醇冲了半个多小时适才看到上面写的要活化什么的不知道我只冲洗半小时就最先用对柱子有没有影响对出峰什么的有没有影响呢答：不是所有的测定都需要对新柱子用所测样品老化但先按要领程序进样几针视察到峰面积保存时间不再有显着转变再最先正式测定这是一个好习惯按你现在的做法若是第一针和第二针的峰面积、保存时间没有转变就继续做没影响吧31、现在色谱柱和仪器的接口还没有标准化吗除了检测池的收支管较小外色谱柱的接口与ＰＥＥＫ头不匹配的有哪个型号的色谱柱以后使用的时间需要注重一点同时发明使用过金属讨论的色谱柱再换成ＰＥＥＫ头常易漏液这是由于金属头易使色谱柱接口变形吗答：色谱柱讨论着实大都不是色谱柱厂商自己生产的供货商有多个VICIUpchurchParker等他们的标准相互之间不统一那色谱柱讨论的标准就统一不起来不过一样平常这个问题也不难明决的换个讨论就可以了并且现在有了万用讨论可以配所有差别类型的柱头不泄露毗连死体积又很小32、通俗的C18柱能作为正相色谱柱使用吗正相色谱系统中最常用也最通俗的是那种色谱柱正相柱在使用历程中与反向柱相比有什么需要注重的地方答：通俗C18柱作为正相柱使用我还没听说过正相色谱疏散模式是指牢靠相的极性比流动相的极性大反过来流动相极性大就是反相C18牢靠相属于疏水性相对较量强的疏水性强就是极性很弱应该找不出极性比它更弱的流动相了正相系统常见的柱子有：硅胶柱、氨基柱、CN基柱和Diol二醇基柱最通俗的应该就是硅胶柱正相柱和反相柱比最需要注重的是水分正相柱对水分很是敏感流动相中水分含量的些微转变对保存时间影响很大因此正相柱测定前平衡时间需要几个小时甚至更长33、色谱柱的柱头类型与不锈钢毛细管讨论有6种毗连方法（在课本内里提到）那么我们用户一样平常是液相色谱仪是牢靠某一个厂家而是凭证样品检测需要替换差别类型的色谱柱那么怎么判断我所购置的色谱柱是否与不锈钢毛细管是否匹配呢我之前只是知道安捷伦和waters都有划定他们自己家的柱子与自己家的仪器配套是最合适的而其他厂家的色谱柱都很少提及在不知道的情形下我们该怎么选择月旭的色谱柱柱头类型属于哪一种类型呢答：不锈钢毛细管讨论有个弱点用过一次后卡匝位置和距离毛细管最后的长度就牢靠死了若是下次用的色谱柱的柱头接口深度和原来的差别就容易爆发死体积和走漏爆发的死体积一样平常不大若是只引起柱效的稍微下降而没引起拖尾这个问题就容易被忽略引起各人关注的是走漏若是用了新柱子发明和毛细管的接口处有走漏就可以判断是讨论的匹配问题最好的判断要领照旧：询问一下厂商色谱柱柱头的类型和柱头接口的深度然后和毛细管讨论的规格较量若是用PEEK讨论爆发问题的情形就大大镌汰由于PEEK讨论卡匝位置是不牢靠的讨论与色谱柱的匹配并没有在现实色谱应用中造成很大的问题有许多人都没有关注到这个问题一方面缘故原由是使用PEEK讨论的情形很普遍另外若是发明不匹配换个毛细管讨论照旧很是利便的34、相关于气相色谱液相的优势在那里做防腐剂剖析时流动相加入乙酸铵才可以出峰原理是什么答：液相和气相相比的优势有许多,我以为主要在于应用规模更广气相只限于容易气化的低分子量物质的剖析测定工具大部分是基础化工原质料；而任何能消融于某溶剂的物质都能用液相剖析适用工具是分子量从几十到几万的宽大规模在制药、化工、环保、食物和刑侦等诸多主要领域液相都已成为主导的剖析疏散工具也有两者都能应用的交织情形但液相的制样更简朴液相色谱的泛起战胜了气相色谱不可直接用于难挥发、热不稳固及高分子化合物的弱点35、您提到磷酸盐缓冲盐渗透力强有加速硅胶消融的副作用它的保存会降低pH使用规模既然这样经常使用柱子寿命是否也下降的快呀答：经常用磷酸盐在其它条件差未几一样的情形下柱子寿命一定比不必磷酸缓冲盐相对短一些但用磷酸盐也有不可取代的优点吧不然不可能现在大部分人还在用36、CN柱的生涯需要在低温条件可是又不可太低使牢靠相冻结怎么控制这个温度怎么判断牢靠相是否被冻结牢靠相冻结后会是什么样的征象答：所谓低温贮存就是放到阴凉处或者放到冰箱的冷藏室贮存液只要不是纯水冰点都较量低纯甲醇的冰点是零下90度以下了37、我们测试样品时经�；崽逄故欠裉�可是在购置色谱柱时并没有说每一根色谱柱的最大使用压力是几多针对这样的情形用户怎么判断柱压是否凌驾该柱的极限答：装柱时的压力比使用时高许多以是柱压对色谱柱自己在使用时没有极限问题保存倒是一样平常仪器有个40Mpa的上限若是色谱疏散度还能知足剖析要领要求柱压只要仪器能遭受就OK吧38、使用缓冲液不当使硅胶消融并重新形成粉末后会泛起什么样的异常情形怎么处置惩罚答：泛起异常就是柱压升高小粉末在流动相一直冲洗发动下最后会群集在柱子出口端沉积在后筛板处置惩罚要领只有拆下后筛板举行洗濯或替换但这样做会影响到柱床处置惩罚后柱效会下降39、今天才知道滤膜的材质分了这么几种：再生纤维素、聚四氟乙烯、硝酸纤维和醋酸纤维等之前只知道有有机系和水系之分州差别材质的滤膜适合于什么样的样品答：再生纤维素膜：具有卵白质吸收低适用于水溶性样品和有机溶剂；聚四氟乙烯：适用于所有有机溶剂酸和盐；尼龙66：适用于绝大大都有机溶剂和水溶液可用于强酸70%的乙醇二氯甲烷不适用与二甲基甲酰胺；醋酸纤维：不适用有机溶剂特殊适用水基溶液40、我原来遇到个这样的问题一直不知道缘故原由刚拿柱子做色谱条件是成熟的绝对没问题可是该条件下保存的物质变的不被保存好比原来保存时间15分钟却怎么调比例都是2-3分钟就出峰了维护后下次再使用又正常了什么样缘故原由啊答：最大可能是爆发相塌陷了C18柱和高密键合封尾的C8柱在高含水流动相下会爆发相塌陷效果就是保存能力大幅下降用有机相比例较高的流动相冲洗后又可恢复正常性能41、UPLC色谱柱可以反冲吗hplc的色谱柱可以简朴反冲可是uplc的色谱柱.也是一样的吗若是压力偏高该怎么办答：若是两头筛板孔径对称UPLC柱应该也是可以反冲的发明压力偏高虽然也可以用反冲洗濯的要领维护uplc柱和通俗色谱柱比只是压力高一点不应该有什么特殊吧42、通例LC的柱子粒度小柱效高现在有3.5um的通例柱不知道用3.5um*250的压力与4.6um的压力相差几多答：一样平常柱子4.6mmx250mm指的是其内径和长度粒径才用um的单位但一样平常标的是5um也有3.5um的其它条件一样光粒径是3.5um和5um的柱压差别理论上3.5um柱子的柱压是5um柱子的(5/3.5)平方倍数即2.04倍简朴说就是2倍43、由于不知道流动相已走完液相色谱柱空走了或许一晚上讨教这种情形下柱子还能用吗若是可以应该怎样再生答：能用的可能柱子里会有气泡进去但之后多用流动相冲冲看到基线稳固就没问题了用色谱柱的生涯液低流速长时间冲洗然后再检测一下柱效看柱子是否恢复液相最好设置一下最低压限这样就不怕流动相走光而会损伤色谱柱44、在梯度洗脱的时间若是整个时间程序越长保存时间的重现性越差尤其是后出的峰重现性差更显着我猜预计是流量自己的误差引起的可是怎么只管阻止这种情形的泛起使保存时间重现性更好答：这个要控制好情形温度和柱温易挥发的流动相要适当密封同时保存时间的漂移与仪器的精度也有关系45、我对聚苯乙烯-二乙烯苯柱很有兴趣主要是它耐高温、耐酸碱、但有关这方面的文献很少但关于他的疏散效能我一直心里没底我的问题有三：1、疏散效果与ODS较量是相当呢照旧更胜一筹或是更差2、我原以为它是整体住但看过资料后发明也是颗粒的好比5u讨教该类型的柱是否切合速率理论、是不是粒径越小疏散效果会几何级的增添3、问什么没有1.7u的这种柱泛起呢答：聚合物基质色谱柱的优点你已经提到了它的弱点有：对小分子疏散的柱效相对硅胶基质色谱柱要低外貌衍生化修饰也没有在硅胶外貌富厚机械强度低耐压性欠好尚有遇到某些有机溶剂会溶胀等聚合物基质柱虽然也切合速率理论它柱效低主要是由于剖析物在聚合物牢靠相中的传质速率比在硅胶外貌牢靠相中慢许多不过粒径越小柱效几何级增添的纪律照旧有的1.7um的硅胶基质填料也是最近几年才商品化1.7um的聚合物基质没出来也正常或许永远都不出来了由于聚合物耐压差粒径做这么小它基础遭受不了这个高压吧希望以后会有能抗高压的聚合物填料研究出来46、我之前有相识到贵公司也有手性色谱柱之前买过大赛璐的手性柱其手性柱价钱相比通俗反相色谱柱要横跨许多倍不知道是自己柱子装填手艺的难度大照旧其他什么缘故原由它的主要手艺要害在什么方面答：手性柱手艺要害在于手性填料的开发大赛璐公司在手性填料的生产手艺方面申请了专利�；�别的厂商不可生产导致手性柱价钱居高不下前几年传说该公司的专利�；は奁诳斓搅�国际海内有些公司就想着仿制生产厥后又听说专利还没到期情形不明47、样品与离子对天生细密的团结物离子对试剂遮蔽化合物中的极性基团这句话是什么意思离子对怎么样遮蔽化合物中极性基团不就是通过静电引力的作用形成离子缔合物来降低其极性的吗答：离子对色谱是解决强极性物质在反相色谱中保存能力缺乏的一个有用的途径有些碱性极性物质纵然用100%水相做流动相且无论在色谱柱能遭受的pH规模内怎么去调理pH保存能力都不敷若是需要疏散的组分中全是可以离子态保存的那还可以选择离子交流色谱举行疏散不然的话就只有选择离子对色谱要领了只管它有撒播的那么多副作用保存离子对试剂含亲水基和疏水基很像外貌活性剂以是一最先离子对色谱也称为皂色谱离子对作用的机理有两种诠释你上面都已经提到了究竟是哪种诠释对尚无定论现实上也没须要去定论横竖两种诠释都通就可以了我小我私家以为两种机理都可能保存要看离子对试剂、牢靠相和剖析物这三者自己情形而定若是离子对试剂的疏水端和牢靠相之间的结协力相对更强示意图的作用机剖析占优势反之离子对试剂亲水端和剖析物导致遮蔽极性端的作用力更强你后面提到的机理更可能总之要看你用的什么离子对试剂是何种的剖析物等详细情形差别而差别吧48、我们在用的氨基柱时有时间峰型突然变宽有拖尾用一段时间就又好了不明确是什么缘故原由造成的若是要再生氨基柱的时间应该怎么做呢是像您先前回覆的问题中提到的用一定比例的氨水冲洗吗氨基柱可以直接用纯水冲洗吗记得其时买的氨基柱谁人使用说明书上说不可用纯水冲是这样的吗若是可以冲的话一样平常冲多久答：氨基柱的硅胶孔内的氨基浓度很是高（约莫有1mol/L）在有水保存的时间在孔内形成一个pH10左右甚至凌驾10的很强的碱性小情形并会导致硅胶基体逐步消融不过硅胶基体的消融会天生酸性的硅醇基又会降低孔内的pH值延缓硅胶基体的消融历程一段时间后两个相反的历程会告竣一个动态平衡从而稳固下来对你问题提到的这个征象我想到的是这个缘故原由氨基柱要看氨基柱的应用模式是正相照旧HILIC这两种模式的情形是大不相同的正相使用一样平常很怕有水但HILIC模式应用一样平常流动相是乙腈/水是不怕水的不过键合氨丙基基团很是容易水解以是一样平常氨基柱不相宜生涯有水的溶剂中作为正响应用时流动相中要求一点都不可含水但洗濯柱子上的污染物质是可以含水的由于水有强极性在正相色谱上洗脱能力极强虽然不必用100%纯水氨基柱详细冲洗要领正相条件凭证正相硅胶柱的洗濯要领HILIC模式按C18柱的洗濯要领49、接纳国标用C18柱测定辣椒精辣度将辣椒精中添加吐温系列乳化剂做成水溶辣椒精讨教乳化剂对C18柱是否有影响答：乳化剂和离子对试剂类似有极性端和非极性端一定会对C18柱有影响不过若是辣椒精是极性物质乳化剂的保存到可以提高其在C18柱上的保存能力50、公司凭证国标测定辣椒红色素中苏丹红含量标品疏散很好峰也不错可是辣椒红色素由于跟苏丹红性子很相似且颜色较深疏散效果很差收得率很低测定效果误差很大该如那里置样品色素是否会降低柱效答：色素不会降低柱效但辣椒红色素主峰浓度过大会影响与邻近杂质峰的疏散可思量稀释样品或试试用柱效更高的柱子51、通常我们在剖析自然药物因素的时间结构重大无法考察组分的PKa值哪我们怎样去选择最合适的流动相或者是拖尾该怎么改善呢答：若是自然产品中没有易电离的极性基团就不需要用缓冲盐调理pH若是自然产品中既有酸性基团也有碱性基团譬若有pKa=6.2的羧基和pKa=9.0的氨基的两性物质建议将pH用磷酸盐缓冲盐控制在2.4（若是是诸如月旭的Ultimate LP-C18这样的耐酸色谱柱还可以调得更低）若是pH控制在6.2-9.0之间两个基团都处于离子态保存能力最差是最不可取的若是不清晰重大物质中含有什么基团也请将pH调到2.4或更低由于pH调低最少抑制了酸性基团的电离而处于中性分子状态而增添酸性基团这个部分在反相色谱中的保存能力；另外低pH还抑制了硅醇基的活性有利于获取对称的峰形情形不明时间为什么不建议调高pH呢一方面一样平常色谱柱都不可遭受pH9以上的条件；纵然是像月旭的Xtimate系列一样能耐12.5的柱子调高pH和调低pH相比尚有一个硅醇基活性大的劣势52、记得以前拿到C18柱会用甲醇从小流量到大流量逐步活化这样做的目的是什么呢是先用溶剂活化吗然后再用样品尚有测定短肽总是冲出来该怎么解决呢就是和溶剂峰出在一起或者出在溶剂峰之前?答：C18柱会用甲醇从小流量到大流量逐步活化由于色谱柱抵达用户手中时时间是非纷歧在存储和运输的历程中可能存储液有些挥发低流速的甲醇可以很好的浸润牢靠相使键合相很好的舒展用溶剂平衡好系统后可以接纳多次进样或者加大进样量的方法以更快的获得重现的色谱图这样用样品将色谱柱中的活化点饱和就不会泛起异常色谱征象的情形53、C18柱若是之前曾有些天一直生涯在酸性情形中会对柱子有什么损坏吗ph在2左右答：pH2左右容易使键合在硅胶基质上的牢靠相水解流失包括C18和封尾试剂的水解封尾试剂相对更容易水解不知道你生涯的酸性情形是不是含有缓冲盐若是不含缓冲盐只是短期几天生涯在酸性流动相中也不必过份担心最多相当于这几天一直在使用这根色谱柱因此镌汰几天的使用寿命吧；有缓冲盐就贫困一点生涯时代水分挥发可能会导致缓冲盐结晶在柱内析出对柱子损伤很大54、色谱柱的装置有什么技巧吗只要包管不漏就行了吗尚有所谓的死体积怎么测定呢答：色谱柱装置技巧未几只要讨论和柱头匹配确实拧紧不漏就可以了但也要注重不要拧得太紧以至于损伤螺纹所谓死体积就是完全不保存的物质出峰时从进样到流过色谱柱的总体积一样平常用极性很是强的尿嘧啶的出峰来测定死体积包括柱体积（色谱柱内溶剂能占有的空腔体积）和柱外体积两部分你从厂商这里买到色谱柱柱体积已经是牢靠了你能只管阻止镌汰的是柱外体积进样器内死体积、毛细管长度、毛细管和色谱柱毗连紧凑与否�；ぶ蛟谙呗似鞅⒌乃捞寤尴�都对这个有影响样品在柱内除扩散外尚有和填料作用引起的组分疏散；但样品在柱外那就只有扩散这个使柱效下降的因素了以是要取得好的疏散效率柱外体积应该是越小越好峰有时间前延有时间拖尾一样平常不是色谱柱的问题应该是样品和色谱柱填料的作用问题可以说若是色谱柱类型选择没问题要害就是色谱条件的选择包括进样量、样品溶剂、流动相组成（包括添加剂）、流动相pH以及柱温都对峰形有影响另外测定分子量较大的多肽用样品老化平衡色谱柱很主要分子量越大的物质需要平衡时间越长若是柱子没平衡好峰形也可能会不正常以是最好把你详细的测定条件也列一下也便于有针对性的剖析缘故原由55、测定多肽样品时十几肽或者二十几肽时有时峰前延的较量厉害有时峰拖尾较量厉害这是什么缘故原由呢是样品的问题照旧柱子的问题答：峰有时间前延有时间拖尾一样平常不是色谱柱的问题应该是样品和色谱柱填料的作用问题可以说若是色谱柱类型选择没问题要害就是色谱条件的选择包括进样量、样品溶剂、流动相组成（包括添加剂）、流动相pH以及柱温都对峰形有影响另外测定分子量较大的多肽用样品老化平衡色谱柱很主要分子量越大的物质需要平衡时间越长若是柱子没平衡好峰形也可能会不正常以是最好把你详细的测定条件也列一下也便于有针对性的剖析缘故原由56、柱子的平衡时间跟填料关系大吗哪种最快哪种最慢由于我在做离子交流柱的时间平衡是相当的慢答：凭证色谱速率理论粒径越小柱效越高并且当粒径小到亚2微米左右时线速率的提高其疏散度就不再降低从而改变了许久以来人们不得不在 速率和疏散度之间取舍的时势57、关于设置流动相有机相我们可以甲醇乙腈同时用这个是基于什么思量的是不是凭证甲醇乙腈选择性差别、样品在这个两者的消融度的差别以及调理洗流动相脱能力来思量的答：甲醇和乙腈同时用可以获得纯粹的甲醇或者乙腈纷歧样的选择性并且洗脱能力也会改变凭证多元流动相的强度因素Sab.....=Saψa+Sbψb=...Sa和Sb纯溶剂a和b的溶剂强度因素；ψa、ψb划分为a和b的体积分数以是在药典中有许多系统都使用甲醇乙腈系统；58、三乙胺磷酸盐缓冲液作流动相柱压一天比一天高该怎么样解决答：把柱子再生下再生的要领搜一下有许多反冲对绝大部分色谱柱都是可行的效果不错59、新出厂液相色谱柱�；と芗烈谎匠Ｊ鞘裁�怎样举行平衡洗濯较量好一样平常要平衡多长时间较量好答：柱子类型差别生涯溶剂也会纷歧样吧详细要看说明书的说明关于反相柱一样平常用甲醇（乙腈）生涯也有用80%左右甲醇浓度的甲醇/水生涯的一样平常用流动相平衡冲洗10-20个柱体积即可（注重：柱体积不即是空柱管体积4.6x250mm的色谱柱空柱管体积是4.15ml而柱体积只有约2.5ml）60、听说液相色谱柱柱压抵达一定高度就不可使用了讨教一样平常抵达多高用甲醇和乙腈是不是纷歧样答：柱压不是色谱柱不可使用的唯一因素疏散度才是最主要的柱压只要没高到仪器不可遭受的田地例如凌驾300bar就可以一直使用甲醇的粘度比乙腈高同样状态的柱子若是用甲醇做流动相柱压可能超了换用乙腈会使柱压下降不少仪器还能遭受不过只管柱压还没上升到靠近400Bar的限制若是发明柱压上升速率较快也需要及早对柱子举行洗濯维护从基础上扫除导致柱压上升的源头61、柱塞板可不可拆下用超声波洗濯会有什么不良效果答：不建议将柱筛板拆下洗濯由于拆下承压的柱筛板会导致柱床爆发转变影响色谱性能应该对污染的色谱柱先举行洗濯维护维护没有用果再把拆洗柱筛板作为最后的手段62、一样平常正常使用一个C18柱能用多长时间答：柱寿命一样平常不准时间盘算按一连进样针数较量科学一样平常正常使用维护不凌驾pH和温度等规模C18柱能抵达500-2000针进样的寿命视样品清洁水平的差别而差别63、超高压快速高疏散度色谱柱是不是未来液相色谱柱普及应用的一个生长趋势答：这是个假话题以后使用会越来越多是一定的可是否会替换通俗压力的液相尚有争议超高压也有使用上的未便譬如容易堵对装备硬件要求高等有机会我再谈谈超高压液相色谱方面详细的一些情形月旭公司作为专业的色谱柱生产商今年也会推出自有品牌的超高压液相色谱柱以知足一直增多的客户需要64、若是液相色谱谱图基线漂移很大是不是柱子的问题波长越小的越大270nm的还不怎么能看出来230nm的就很是厉害了有可能是什么缘故原由造成的答：有可能是你的流动相的问题230可能已经快到你流动相的阻止波长了虽然紫外吸收强基线漂移厉害65、我们有一台waters1525色谱仪最近基线总是泛起海浪形很有纪律波长越小越显着梯度洗脱时向上萧洒并且后一段时间泛起海浪形很影响剖析我想问一下是不是柱子的缘故原由用的是C18上海安普的答：应该是流动相组成变引起吸收本底转变造成的特殊是在波长小的时间乙腈的阻止波长低于200nm但甲醇和水相对较量高在低波长时甲醇和水有一定的本底吸收梯度举行时随着差别本底的组分含量的转变基线也会有响应的波动66、我是做农药残留剖析的用的是UV2487检测器想问一下C18色谱柱用什么缓冲液较量好我以前做三聚氰胺是用柠檬酸辛烷磺酸钠也用农药检测行不可尚有用HLB柱能不可去除蔬菜和水果中的杂质答：C18色谱柱用用磷酸盐醋酸盐就较量好啊离子对试剂不是个好东东你要慎用我们做三聚氰胺用三氯乙酸67、液相色谱柱一样平常使用寿命多长差别类型的色谱柱是否寿命也纷歧样液相色谱柱与气相的柱子有何区别呢答：液相色谱柱一样平常使用寿命多长我有一根柱子用了约莫1年半左右发明同样浓度的样品它的峰展宽了说明柱效下降可是不影响效果由于峰面积照旧靠近以是做色谱之前先做下柱子性能测试第一次的图谱要保存测试C18 RP柱一样平常用到萘作为柱子的柱效判断一样平常是18000片对称性（usp）0.95-1.05间液相色谱柱与气相的柱子有何区别呢HPLC 是走液体的分正相反相反相为例Si 接着C18（键和相）,电镜下看起来像绒毛一样的以是一样平常用甲醇乙腈�；P柱这样它的绒毛呈舒展状GC 走气体的牢靠相涂布牢靠液68、1.水相指的是什么纯水2.我们实验室的CN基柱生涯在40%的乙腈内里这个有不良效果吗答：水相就是纯水CN基不适合生涯在中等极性的溶剂中除了可以低温生涯在极性较大的纯水中外尚有可以生涯在非极性溶剂如正己烷中40%乙腈水属于中等极性溶剂短期住宿生涯可能问题不大恒久生涯不太好效果就是可能会爆发柱床坍塌69、CN基柱应该怎样维护才好呢好比做完实验用什么流动相冲柱子、短期用什么溶剂生涯、恒久用什么溶剂生涯等等答：CN可作正相柱也可作反相柱用除了生涯溶剂有特殊要求外其它维护步伐和一样平常正相和反相柱没有多大区别70、月旭公司的液相色谱柱讨论是公共的照旧有自己的规格我们是waters的剖析仪有月旭的产品可不可以答：月旭公司的色谱柱柱头的规格是公共的由于我们也不自己生产柱管和柱头月旭的柱管柱头供货商也是和一些Waters、Agient和Phenomenex一样的也许是统一家月旭柱头规格标配是Valco型但也可以凭证客户要求提供Parker型和Waters型你用Waters的仪器而最先也用的是Waters柱子若是是用不锈钢讨论匝扣的位置就牢靠了若是用月旭的柱子可以把牢靠匝扣位置的那段剪掉换一个新的匝扣就可以重新牢靠匝扣位置虽然若是你已换成PEEK讨论问题就不会很大71、色谱柱的讨论出口处用的是peek讨论讨教都用peek讨论不可么为什么答：都用PEEK讨论我以为都可以的虽然PEEK讨论的质量要过关有人以为PEEK讨论不耐压预计是针对品质欠好的产品说的72、我们的液相为了节约本钱我们自己填�；ぶ�用废的同型号柱子填但填完以后做标样定量剖析有所改变讨教其缘故原由答：不建议自己填�；ぶ�填得欠好的柱芯会影响疏散效果也会影响定量剖析效果你不知道废柱子里的填料是不是受了污染另外你填的柱芯一定没有厂商填得好若是影响到峰形峰面积积分效果有所改变是可能的73、讨教怎么测柱效柱子填料是SinoChrom ODS-BP 5um 规格4.6mm*200mm答：测定柱效差别公司纷歧样有用甲苯也有用萘的一样平常柱子内里有检测报告你凭证报告里的要领做一遍就可以74、我用苯试了一下峰性大大好可是不知原理论塔板数不知道怎么评价感受不大好对称性欠好有点前延柱子才用了四个月是什么缘故原由呢是不是塌陷了呢有什么调解的步伐吗答：用了四个月峰形拖尾是很正常的需要维护洗濯一下色谱柱以扫除引起拖尾的柱头污染若是柱头塌陷则欠好办从其它废柱子里取点填料填补塌陷可以一试但效果纷歧定好色谱柱是耗材测定进样针数若是抵达500以上了也算是物有所值物尽其用了报废了也不可惜75、流动相里之前有酸的做完后纯粹用乙腈冲洗能把酸冲洗清洁吗之前他们是这样冲的现在嫌疑柱子塌陷了会不会是长时间在酸性情形中造成的呢答：流动相里有酸应该先用纯水或80：20的水/乙腈溶剂冲洗吧若是一直在酸性情形牢靠相容易流失造成保存时间前移和其它色谱性能下降76、我前一段时间做三聚氰胺用C18色谱响应值很小险些无法检测可是检测标准就是用的C18厥后我用RP18效果响应值很好不知道什么缘故原由讨教这两个柱子不都是反相色谱柱么他俩之间有什么差别答：RP18就是C18吧不过C18柱之间也有区别测定三聚氰胺一样平常要用极性较量大的水性C18柱77、磺化交联的苯乙烯-二乙烯基共聚物为填充剂的色谱柱在贮存历程未注重放在冰箱中导致发霉后柱效急剧下降能何种要领将此色谱柱修复好答：聚合物柱子由于不怕酸碱就直接用强酸强碱洗濯若是是H型用1M硫酸冲洗；若是是Ca型可以先用1M硫酸冲洗再用EDTA钙盐转换回Ca型柱；若是是中性的聚合物反相柱直接用1M的NaOH冲洗78、我有一个标准的稳固性检测剖析要领它是建设在某一供应商的碳18柱上我知道有另一个厂家生产同样的碳18柱但价钱是它的一半若是我替换柱子会不会影响到剖析要领答：要看这一剖析要领的详细要求若是要领中有说明使用某一色谱柱或与其同样的柱子那么就可以使用别的柱子来替换但要注重不可光看一个柱子标为碳18柱或是其宣传等价于某某柱就以为该柱适用于所有要领必需要验证色谱柱的等价性我们需要考察使用新柱子时系统顺应性是否可以通过验证若是可以获得系统适用性测试中所要求的保存值疏散度以及其它参数等就可以使用该柱推荐使用系统适用性测试样品以及其它的典范样品来举行考察以包管杂质和降解物在准确的保存时间出峰并给出准确的浓度响应；并且在新柱子上获得的剖析效果要等价于在原柱子上的效果79、讨教我做一种药的剖析查美国药典划定使用100mm×40mm8μm的色谱柱流速3mLmin可现在市场上已禁止易找到这种规格的产品于是我按USP中色谱柱较量的数据库的指引选了一款选择性一致的等价色谱柱其规格是100mm×46mm3μm的色谱柱中选用3mLmin的流速时发明柱压超高讨教我怎样对要领举行调解以知足USP的要求答：流速调解原则是流动相通过柱子的线速率一致等价柱的截面积大了流速也应增添才华坚持相同的线速率新流速盘算效果是：（4.6/4.0）2x3.0=4.0ml/min但3ml/min流速都已导致柱压太高4.0ml/min显着不可幸亏USP尚有个允许±50%的流速调解指导原则这样将流速调至2.0ml/min既切合USP划定又能使柱压降到可接受的规模但这种改变不可引起其它欠好效果这个例子中等度剖析中流速改变会引起塔板数和峰宽的改变但不会影响峰的选择性3um粒径色谱柱柱效比8um的高许多可思量缩短柱长以赔偿或部分赔偿流速降低造成的测准时间增添以是更佳选择是50 mm ×4.6 mm, 3μm的柱子2.0ml/min的流速运行可以在切合USP划定的情形下又获得更快速的测定疏散80、最近我很是的沮丧凭证药典上的色谱条件和要领做某药物的剖析却始终得不到知足的效果有人建议我对色谱条件如进样量、流动相pH和温度等举行微调以获得优异的峰形和疏散效果可按公司划定我不可这样做怎么办答：若是你心里老有这个头脑定势按划定我不可......然后什么也不敢做那真是欠好办只有去做了去试着改变条件看看获得什么效果你才华发明问题所在若是改变条件后仍得不到好效果就要去找色谱条件以外的缘故原由如色谱柱、色谱仪器以及样品和制样历程中的是否保存问题不管通过微调你是否取得了好效果你也有了向向导汇报问题息争决计划的依据并且绝对不可调解药典划定色谱条件的说法通常是差池的美国药典USP说的是若是改变药典要领需要重新做要领验证但要领调解或者称微调以切合系统顺应性的要求是允许的是不需要重新做要领验证的USP列了调解的几条指导原则如±50%的流速调解±10 °C的温度调理等等（详见"Chapter 621,Chromatography," United States Pharmacopeia No. 31-NF 26, (2008).）虽然既然是指导原则这些划建都不是绝对的如温度调解±10 °C对有些要领适用对另外的方规则±5 °C的调解都会有问题我们应该依据详细情形作出明智的科学判断81、讨教下HibarRT250-4这个柱子很特殊么为什么许多药典中的药物疏散都用它做柱子由于才最先做药不知道hibar的柱子特点是什么答：HibarRT250-4是Merk的一个品牌不是很相识或许是共用柱头可替换的柱管82、在碱性条件下硅胶消融又天生硅羟基的机理是什么反应方程式怎样写答：二氧化硅消融的反应式是：SiO2+2OH-=Si032-+H2O或者体现成水解的形式：SiO2+H2O=Si032-+2H+这说明硅胶会在碱性条件下消融而天生硅酸根但我们这里说的是硅胶颗粒外貌的部分消融含有键合牢靠相的硅胶原外貌消融脱落伍自然会天生新鲜的硅胶外貌而新鲜的硅胶外貌结构一样平常都是含有硅羟基的硅胶基本结构单位是Si-O-Si键在OH-离子的作用下Si-O键断裂在外貌形成Si-O-H硅羟基的结构单位必需指出的是在氨基柱的孔内并没有单独加入OH-离子偏碱小情形的形成是由于氨基易和水电离天生的氢阳离子团结造成的游离OH-离子的过剩从第一个方程式角度诠释游离的OH-离子用完硅胶就不再继续消融；从第二个水解形式方程式角度诠释：当硅胶水解天生的H+ 离子足够用来和氨基结适时水解历程就会变慢或阻止83、同样都是C18柱子液相色谱柱和SPE他们之间有什么区别能详细讲一下么答：HPLC柱子和SPE小柱的比照：比照项目 HPLC SPE柱管 不锈钢管 塑料管粒径（um） 3,5,10 40-300颗粒形状 球形 一样平常为无定形柱效（塔板数）20-25000 <100疏散机理 一连洗脱 数字式开关洗脱售价（元） 1000-4000 10-40使用方法 可重复使用 一次性使用操作本钱 较高 低装备本钱 高 低关于C18牢靠相为了提高接纳率SPE里用的C18填料一样平常载碳量相对更高84、我从上面相识到RP18和C18的区别是极性强一些能问一下他们在剖析农药是可不可以通用C18适用于那些农药的剖析我查质料看到苯醚甲环唑都是用C18剖析的可我用C18剖析发明响应值很小没法剖析能资助剖析一下缘故原由么答：RP18和通俗C18一定有其差别的顺应性农药种类这么多可能大部分农药两者都能用有些就纷歧定你问的C18适用于哪些农药应该从相关农药剖析方面的书籍手册中可以查到详细什么农药用什么色谱条件合适其中内里一定有选择什么类型柱子我这边没步伐逐一枚举液相色谱中60%以上的剖析物可以用C18柱我想也应该有60%以上的农药可以用C18柱若是手册或文献中查不到你把农药作为通俗剖析物来看待然后凭证一样平常的色谱柱选择和要领建设原则来做就可以选择决议因素应该也是农药分子的结构苯醚甲环唑应该含有极性基团可以试试极性强的C18柱85、我在用乙腈作流动相时只要谁人乙腈比例稍高一点好比20%纵然丈量波长高于乙腈阻止波长较量多也会爆发较量大的溶剂峰这怎么回事答：若是泛起溶剂峰对你的剖析效果没任何影响那就让溶剂峰在那儿好了或者你用划定的溶剂消融提取样品后再用流动相稀释一下样品若是稀释后检测限能抵达的话86、我在做一个模拟胃内容物中药物反应试验需要动态测定某药品含量转变剖析时遇到一个棘手问题进样量同样用20ul用比照品进样时色谱峰形不错进样品时却一直不可获得好的峰形厥后剖析是模拟胃内容物样品的酸度过高的因素可我通过稀释的要领让样品酸度和流动相靠近虽然峰形没问题了却发明因稀释导致剖析物在样品中含量下降低于最低检测限了怎样是好呢答：稀释很利便但迅速度更高的检测器禁止易找不过照旧有个简朴的解决计划当用流动相稀释样品时只要稀释后样品中有机相含量比流动相中的有机相比例低10个百分点以上（如流动相中甲醇含量是40%则样品中甲醇含量一定要低于30%）样品流动会被色谱柱入口端延缓或阻挡称为柱上富集由于柱上富集作用的保存这种情形下举行概略积样品进样可阻止样品溶剂组成和流动相一样时进样量过大爆发的峰展宽针对你提的这个实例可用稀的NaOH溶液调理样品pH和流动相匹配并将样品最终稀释一倍将进样量提高一倍到40ul就可抵达最低检测限的要求87、峰形后拖尾是什么缘故原由造成的答：[柱物理损坏]色谱柱有物理损坏是造成峰形拖尾的泉源唯一的解决要领就是替换新柱[柱内填料污染]流动相和样品中的杂质是色谱柱主要污染源流动相所用的种种溶剂至少是剖析纯只管使用色谱纯试剂流动相所用的水最好是超纯水或全玻璃器皿双蒸水用前先用0.45um溶剂微孔过滤（器）过滤除去可能保存的微粒流动相建议现用现配关于含盐的溶液尤其注重长置会爆发细菌或泛起沉淀别的还得包管贮存流动相的容器清洁重大样品可选用0.45um溶剂微孔过滤（器）或样品预处置惩罚柱对样品举行预处置惩罚确保样品中不含微粒杂质若样品未便处置惩罚要使用�；ぶ�柱内填料污染时可将柱头螺丝卸下用专用工具挖出柱内前段被污染填料再以相同的填料重新填入修复或以能消融污染物的流动相按色谱柱使用的相反偏向冲洗色谱柱（约20至30倍柱体积或视详细情形而定；另外此时不可接检测器）将污染物冲精彩谱柱再按色谱柱标明的使用偏向使用[柱入口处有异物]当断定是柱入口处有异物时可将柱头螺丝卸下取出滤帽并将其置于20%硝酸溶液中用超声波洗濯约20分钟再置于超纯水中并用超声波洗濯约10分钟重新装入色谱柱内即可[样品浓度过高致使柱超载]样品在柱上超载能引起峰展宽拖尾（或伸舌）适当减小进样量或样品浓度（需要时可提高检测器迅速度）直至峰形和保存时间不再改变便可消除这种不良影响减小进样量还能改善其疏散度正常情形下样品中每种化合物在150×4.6mm柱中进样量坚持在3～50ug规模内不会引起显着超载[样品溶剂差池]选择合适的样品溶剂以扫除不须要的滋扰最好选用流动相消融样品[柱外效应]柱外效应（即进样阀、色谱柱及检测器间的管途经长、直径过粗、管路讨论不匹配、有死体积）是影响色谱柱柱效的主要因素之一以是在可能的条件下色谱柱的两头毗连受路要尽可能短毗连受内径尽可能细小切口务必平整平滑尽可能的减小死体积以避免因样品扩散造成不可反应色谱柱真实柱效等情形爆发[缓冲缺乏或不对适]在缓冲欠好或离子强度过低的疏散中也会泛起保存时间重现性差和峰形拖尾增添缓冲浓度（与样品巨细相匹配）能改善此情形[硅醇基团作用]仔细剖析色谱柱内填料外貌性子可知：反相色谱柱填料的外貌约莫被键合相笼罩了一半其余的就是未被键合的硅醇基团所谓的保存是指样品分子与键合相相互作用的效果可是酸性或碱性化合物与硅胶外貌剩余的硅醇基团或金属杂质之间相互作用而引起双重保存机理因此爆发了峰形拖尾为了减小峰形拖尾通�？稍诹鞫嗉尤�25mM三乙胺（抑制剂）三乙胺能与硅醇基团爆发强烈的相互作用从而降低或阻断样品分子与硅醇基团的作用以包管保存机理正常举行并大大缓解了峰形拖尾使用长链的硅醇基抑制剂虽起效较慢但一连力较三乙胺长由于抑制剂分子中除了胺基与硅醇基团爆发极性作用外大分子中非极性部分与牢靠相也会爆发反相作用而爆发保存征象若是将抑制剂加至样品中效果会显著[柱内金属污染]柱内金属污染（FeNi等）可引起某引些化合物峰形拖尾金属可由填料自己带进也可由侵蚀性流动相缓慢消融柱入口的金属滤片随流动相沉积到柱填料中例如C18柱填料被金属污染后造成酸性/碱性样品拖尾可用碱洗/酸洗后再键合的填料获得的峰是尖锐且对称的88、流动相与柱子怎样才华做到匹配抵达最好的疏散效果现在我们实验室有购置好的色谱柱可是对样品的疏散效果不是很好答：差别填料的色谱柱都有自己的选择性相同填料差别厂家以及相同厂家差别品牌之间的选择性都是纷歧样的一样平常情形下凭证物质的性子将疏散的大偏向如：正相剖析或者反相剖析确定后一样平常可以凭证调理色谱条件能获得好的色谱峰形这方面的资料论坛当中许多可是也有些色谱柱不管怎么调解色谱条件都不可外貌这款色谱柱的选择性不适合该样品的选择89、我用的是C18柱后面玄色的是我以前跑的图前面是我现在跑的图形完全一样的工具只是流动相不是一批配的（流动相的因素没变）中心柱子别人用过了峰型怎么爆发了这么大的转变啊可能的缘故原由是什么啊是不是柱子出了问题啊答：从两个图比照很显着可以看出是柱效严重下降且伴有肩峰差别时间配的流动相若是因素和pH没变的话一定不会造成这个效果预计是别人用柱子历程中造成了柱头塌陷、柱头污染以及牢靠相流失等严重问题如样品太脏流动相或样品pH太高或太低都会造成这个效果你可以试着用色谱柱洗濯和再生的要领反冲维护一下但不可包管一定能回到原来的效果再生若是不可思量挖补柱头填料着实不可柱子也只能报废建议柱子最好照旧专门用于一种要领较量好像你这种情形都搞不清别人怎么用柱子的剖析解决问题就相当难90、柱子的柱效影响大吗一样平常柱子的柱效划定是几多的呀理论塔板数一样平常要抵达几多呢主要有那些因素影响它答：柱效是柱子性能优劣的一个主要体现指标柱效会影响疏散度虽然是峰形越尖锐柱效越高和其它峰越容易脱离另外柱效岑岭形尖锐对峰面积的积分误差就小甚至可以用峰高来定量一样平常C18柱在测定甲苯等不易拖尾的小分子中性不电离物质时5um的填料每米的柱效能抵达80000以上的塔板数就算及格吧在现实剖析物的测准时一样平常药典有划定最低柱效是2000-3000一样平常新柱子的柱效都高于这个数但柱子在使用后由于牢靠相流失等缘故原由柱效会逐步下降当下降到不切合药典最低柱效要求或者导致疏散度不敷时色谱柱就算寿命到了单从柱效逐步下降这个角度看柱效高的色谱柱相对使用寿命更长影响柱效的因素有粒径、粒径和孔径漫衍、牢靠相键合密度、柱外体积和温度等柱子装填细密、柱床匀称一致也对提高柱效有利益这些影响因素中许多是和生产厂商有关你这边能做的是只管镌汰柱外毗连体积91、流动相中加入四氢呋喃对柱子有损害吗?我现在剖析一样品流动相中用到20%的四氢呋喃才华把峰分到基线.但柱子只能用一个星期疏散效果就欠好了.讨教是四氢呋喃损坏了柱子吗?答：四氢呋喃（THF）是反相色谱中洗脱能力极强的溶剂比甲醇和乙腈都强许多在流动相中加入THF能改善某些难疏散的物质对的疏散度但THF不稳固容易降解天生具有很强反应活性的过氧化物能与剖析物反应天生新化合物导致拖尾、峰破碎和鬼峰爆发高反应活性的过氧化物还可以和填料牢靠相爆发化学作用THF对柱子有损伤这点是无疑的并且这种损伤是随时间累积的THF保质期一样平常划定是6个月放得越久内里爆发的过氧化物含量越大你应该阻止使用生产日期已良久的THF溶剂并且最好将THF冷藏、干燥和避光生涯使用前最好能检测一下过氧化物的含量92、在用液相色谱同时疏散多种组分时怎么通过条件色谱条件使各个峰抵达较量理想的疏散效果答：这是要领开发的大问题要领开发建设要做的就是：针对剖析物和基体的情形差别选择色谱柱类型和剖析条件包括流动相溶剂类型、组成比例、pH值、温度和流速等参数简直定这方面的问题要讲起来内容很是多93、是样品过载问题,按药典检测要领磨练一些药品有关物质时,都要注入高浓度的供试液,这样往往使得柱过载而峰变形,按先生的要领减小浓度和注入量均是不允许的,怎么处置惩罚这问题?答：药典要领中注入高浓度供试液测定有关物质提高注入浓度是为了把杂质峰的信号增强有时间为了把杂质峰展现出来主峰因过载有所变形如在允许规模内也能接受但条件是杂质峰和样品主峰脱离若是因过载而使两峰没有获得需要的疏散度杂质峰信号再强也失去了意义我以为药典划定的条件是允许在一定规模内举行调理的由于药典没有划定详细使用色谱柱的品牌而差别品牌的柱子上样量是有差别的对色谱条件微调并取获得了很好的剖析效果若是划定不允许那你首先要嫌疑这个划定是否合理或者是否对划定的明确有问题94、哪些缘故原由会造成色谱峰变宽、峰高变低有哪些解决步伐答：确实是这样若是其它色谱条件没有改变柱效下降是导致峰变宽的主要缘故原由关于易电离的极性物质若是流动相pH选择不对适剖析物既有中性分子态保存又有离子态保存峰也会变宽变矮色谱柱使用后柱效逐步下降是正常征象如突然降低则属异常柱效下降缘故原由有许多但柱效快速下降则大都是使用不当造成填料特征或柱床结构改变所致如凌驾使用pH规模造成的牢靠相和硅胶基体的流失、柱床塌陷等；尚有强保存物质吸附在填料外貌形成非特异性吸附层完全改变了原有牢靠相的外貌活性和疏散性能使柱效下降；另外进样时的压力脉冲也会破损柱床结构影响柱效95、我以前做苏丹红用的是安捷伦的SB-C18柱峰形什么都很好最近发明4个标样峰后都带有一个小峰一最先以为是标样问题厥后换XDB-C18后标样又正常了可是用SB-C18柱做其他用正常不知怎么回事尚有像这种C18柱若是压力过高能不可反冲该怎样冲洗一样平常做兽残、农残什么的并且感受三聚氰胺做后压力更易增高且容易引发进样器漏等问题讨教做完三聚氰胺需对系统做特殊洗濯吗答：用SB柱标样后带一小峰并且是只对苏丹红标样测准时有预计和苏丹红标样的测定要领和其它样品测定要领差别有关最好能把谱图贴上来看看是什么样的小峰才华判断是溶剂峰照旧杂质峰XDB柱和SB柱是有区别的XDB键合度高封尾优异反相保存能力强；而SB柱未举行封尾对极性物质选择性好有可能你的苏丹红标样剖析了有极性杂质天生SB柱能把杂质脱离而XDB柱不可这两款柱子压力大了可以反冲有正常维护时的反冲冲洗和再生时的强溶剂冲洗两种冲洗要领在在线讲座里也写了你再回到本贴的前面看看就可以了三聚氰胺和三乙胺类似自己容易和硅醇基作用而吸附在填料外貌另外三聚氰胺测定的样品基体含卵白类的强保存物质较多容易污染色谱柱柱头引起填料间隙梗塞柱压升高最好每次做完样后都用甲醇或乙腈反向洗濯维护一下若有卵白类的污染也准时用本讲座中提到的洗濯要领做一下维护96、我是做农药残留剖析的差别的基质杂质含海量是差别的我用C18剖析时有可能一次就污染了我用高流速和反向冲洗都解决不了是不是这根柱子就废了有没有其他的步伐答：高流速反向冲洗是对的要害你用了什么溶剂冲洗呢用原来的流动相冲洗一定不管用要不然就不会累积在柱子上了你应该用流动相中的强溶剂B冲洗若是不可就需要启用再生的程序虽然再生时用的溶剂更强100％甲醇---100％乙晴---75％乙晴/25％异丙醇---100％异丙醇---100％二氯甲烷---100％正己烷用每种溶剂冲洗至少10个柱体积关于250mm×4.6mm的剖析柱合适的冲洗流速是1～2ml/min最后用10柱体积的异丙醇过渡然后回到原来的流动相系统再生还不解决问题最后一招就是挖补柱头填料把柱头污染的填料挖掉用清洁填料填补进去挖补填料破损原有柱床结构挖补后柱效也不可能有新柱水平或许能再维持一段时间但不会恒久97、尚有溶剂中的金属过滤头生锈了会有什么影响会不会影响到柱子的寿命金属离子和柱子有没有什么反应答：我以为你就把锈当成颗粒物污染的一种会导致拖尾、柱压上升等消融的金属离子一样平常在反相柱上没有什么保存能力马上就会被冲出柱子不会和牢靠相或者和硅胶基质反应98、若是在溶剂过滤时把水膜当成有机膜了消融了并且这样的溶剂又做有机相用了造成C18柱压由1000升到3000流动相是乙腈和水问一下这样的柱子还能用么有没有什么调解要领答：消融的膜作为了颗粒物梗塞筛板引起柱压上升也只有反冲一下若是能把堵在筛板上的膜残渣冲走柱压下降了就OK了；若是残渣进入了柱子内部的填料间隙会难冲一点也只能多冲一会吧着实不可你又舍不得把色谱柱报废就只有挖补柱头填料和换筛板了99、�；ぶ驮ぶ淖饔檬遣皇且谎�若是纷歧样有什么区别么保存时间漂移几多为可以接受的规模答：�；ぶ谎匠４盍�相当于一根缩短了的色谱柱（一样平常是1-2cm长度）卡套里可替换的柱芯柱管、筛板和填料都有�；ぶ锏闹舅坪跏窃谇懊婵返纳ɡ撞蕉�流动相和样品里若有什么损害柱子的污染物�；ぶ妥约涸馐芰讼吕�而预柱现在一样平常指的就是接在进样器和色谱柱之前的在线过滤器在线过滤器和�；ぶ淖畲笄鹗遣淮盍�只有可替换的筛板预柱只能�；ど字馐芸帕Ｎ镏实奈廴�而不可阻挡消融在流动相中的强保存物质保存时间是液相色谱中一个很有用的诊断疏散问题的工具保存时间受流动相组成、温度、pH、流速、牢靠相流失和柱老化等许多因素的影响若是所有这些参数坚持稳固保存时间也坚持恒定但在现实操作中不可能对每个色谱参数举行很完善的控制如即便加了柱温箱温度照旧会有波动；流动相组成会因组分挥发性差别而改变以是保存时间有上下0.02-0.05min的变换是很是正常的对某些要领有0.1min上下变换也属正常保存时间有大的转变预示着系统和要领保存问题流路里有气泡保存泵阀有走漏会因流量降低而导致保存时间增添梯度混淆比例阀故障也是保存时间转变缘故原由之一100、液相色谱柱与气相的柱子有何区别呢答：HPLC是走液体的分正相反相反相为例Si接着C18（键和相）,电镜下看起来像绒毛一样的以是一样平常用甲醇乙腈�；P柱这样它的绒毛呈舒展状GC走气体的牢靠相涂布牢靠液泉源：化学先生编辑整理：德斯特cGMP版权及免责声明：本公众号所有文章除标明原创外均来自网络刊登本文的目的为撒播行业信息内容仅供参考若有侵权请联系德斯特删除文章版权归原作者及原出地方有本公众号拥有对此声明的最终诠释权德斯特cGMP团队一直致力于国际GMP认证咨询；针对美国GMP认证, 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凭证老例方源站在他眼前了几句话我住进江西庭的家照旧由于他无意中望见了我的孕检报告
2025-09-17 13:05:12
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